交叉酶切联合MALDI-TOF/MS分析重组蛋白二硫键分布的方法建立

• 作者: 刘少军 徐祖敏 杨中汉 杨霞 程锐 蔡卫斌 高国全 黎明涛
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因工程 重组蛋白 蛋白质结构 二硫键 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 93-99
• 分类号: Q3|Q71
• 字数: 4848字
• 语种: 中文

摘要

以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法.采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+ - NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Western-blot进行初步鉴定；采用MTT法分析rhK5对微血管内皮细胞的抑制活性；联合应用交叉酶切(Trypsin Gold单切或Trypsin Gold及Endoproteinase ASP-N双酶切)和基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)分析rhK5的二硫键分布；并应用生物信息学方法和圆二色谱法进一步验证rhK5二级结构.应用原核体系高效表达具有生物活性的rhK5蛋白,经交叉酶切联合MAL-DI-TOF/MS证实rhK5中的6个半胱氨酸正确配对形成了3对二硫键(Cys462:541,Cys483:524和Cys512:536),圆二色谱法测定发现rhK5为典型的β折叠型结构.上述研究结果为分析基因工程重组蛋白质中半胱氨酸配对及二硫键分布提供了方法学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨霞	中山大学中山医学院生化教研室	21	123	5.0	10.0
2	蔡卫斌	中山大学中山医学院生化教研室	10	150	6.0	10.0
3	杨中汉	中山大学中山医学院生化教研室	10	68	5.0	8.0
4	徐祖敏	中山大学中山医学院生化教研室	5	11	2.0	3.0
5	黎明涛	中山医学院蛋白质组学实验室	2	8	1.0	2.0
6	程锐	中山大学中山医学院生化教研室	3	20	2.0	3.0
7	刘少军	中山医学院蛋白质组学实验室	1	1	1.0	1.0