烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用

• 作者: 尹朝先 左瑞娟 李凡 王万东 陈海如 龙亚芹
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草丛顶病毒(TBTV) ORF3和ORF4 原核表达 抗血清制备
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 356-362
• 分类号: S432.41
• 字数: 6642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.023

摘要

为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白.用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清.DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测.本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凡	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	63	368	10.0	15.0
2	王万东	云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所	13	100	6.0	9.0
3	龙亚芹	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	17	61	5.0	7.0
5	尹朝先	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	4	12	2.0	3.0
8	左瑞娟	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	4	24	3.0	4.0