人β防御素3重组表达的优化

• 作者: 宋玮 田宇 石勇 肖明振 闫金方
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人β防御素3 基因克隆 重组表达 优化表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R780.2
• 语种: 中文

摘要

目的:通过对β防御素3(HBD3)重组表达实验方法的改进,获得大量有活性的重组人β防御素3(rhBD3),为抗菌肽rhBD3的获得提供新的实验依据.方法:将构建好的原核表达质粒pET32a,/hBD3在E.coli BL21(DE3)中表达,筛选HBD3优化表达条件,并对其抗菌活性进行评价.结果:含有重组质粒的菌株经IPTG诱导后,表达产物经SDS-PAGE显示在约26 kD处看到预期的条带;对不同诱导时间、温度、IPTG浓度时融合蛋白表达率分析的结果表明:rhBD3在35℃、0.6 mmoL/L IPTG、诱导6 h表达量分别达高峰.表达蛋白纯化后,带His-Tag的重组hBD3融合蛋白和酶切纯化的重组hBD3的体外抑菌试验结果显示,该蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抗菌活性.结论:通过基因工程方法,在本实验设定的表达条件下,可以制备出大量具有抑菌活性的rhBD3,为今后rhBD3的研究应用提供实验基础.