华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

• 作者: 余新炳 徐劲 李文芳 李然 王乐旬 邓传欢 黄灿 黄艳
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 LAP2基因 生物信息学 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏·基础研究论著
• 页码范围: 491-495,508
• 分类号: R383.2
• 语种: 中文

摘要

目的 利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化、为进一步研究LAP2功能奠定基础.方法 利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征.针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位.结果 华支睾吸虫LAP2基因全长为1 761 bp,其编码序列长度为1 662 bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59 696.5 Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%.该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜.结论 华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一.