柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达

• 作者: 姜连连 曾艳波 朱顺海 林矫矫 程军 董辉 赵其平 韩红玉 马卫娇 黄兵
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 子孢子 裂殖子 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 108-113
• 分类号: S852.7|Q78
• 字数: 4692字
• 语种: 中文

摘要

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583.该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征.利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段.将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD.免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性.该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础.