堆型艾美耳球虫ATP酶基因的生物信息学分析及原核表达

• 作者: 孔苗 董辉 阎晓菲 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 堆型艾美耳球虫 ATP酶 遗传进化 生物信息学 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 65-73
• 页数: 9页
• 分类号: S852.723
• 字数: 5684字
• 语种: 中文

摘要

为研究堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶(Eimeria acervulina Na+-K+-ATPase,EaNKA)蛋白的生物学功能,根据EaNKA基因(GenBank登录号:EU590120.1)设计1对特异性引物,以堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板,对EaNKA基因进行PCR扩增,将PCR扩增产物克隆入pUCM-T载体并进行测序鉴定,将测序获得的EaNKA基因编码蛋白进行生物信息学分析.EaNKA基因全长1157 bp,位于第81-368 bp之间,编码236个氨基酸,分子量约为25 kDa.编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,有12个结构功能域,2个跨膜区,位于多肽N端的7个抗原表位.Blast分析显示其编码蛋白与堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶相关蛋白序列(XP013248919、ACB97673)的同源性为100％.构建重组质粒pET32a(+)-EaNKA并进行测序鉴定,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞,进行SDS-PAGE和Western blot表达鉴定.结果显示,构建的重组质粒可在原核细胞中成功表达45 kDa的融合蛋白.本研究成功获得EaNKA基因的全长序列,并在原核细胞中成功表达,为今后研究该基因的功能及筛选基因工程疫苗候选分子奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄兵	中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室	43	485	12.0	20.0
2	董辉	中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室	15	91	6.0	9.0
3	韩红玉	中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室	17	147	6.0	12.0
4	阎晓菲	新疆农业大学科学技术学院	27	94	6.0	8.0
5	孔苗	新疆农业大学科学技术学院	1	1	1.0	1.0