肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 侯顾伟 奚永兰 姜岷 隋姗姗 马江锋
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 蔗糖磷酸化酶 肠膜明串珠菌 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 157-161
• 分类号: Q78
• 字数: 3712字
• 语种: 中文

摘要

以肠膜明串珠菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 581 bp的蔗糖磷酸化酶(SPase)DNA片段.将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,构建获得重组质粒pET-SPase.测序结果与GenBank上已公布的基因序列比较,有1个碱基发生变化,但该碱基的改变未引起氨基酸序列的改变.将pET-SPase转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态中,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约为55 kD,与预期大小一致,结果表明SPase基因在大肠杆菌中进行了表达.酶活分析,产物的比活为1.8 U/mg,证明了表达产物具有预期的酶活性.进一步考察了IPTG浓度、诱导温度和时间等因素对重组菌表达的蔗糖磷酸化酶的影响.在优化条件下,该蔗糖磷酸化酶的比活可以达到16.6 U/mg,比优化表达条件前的酶比活提高了9.2倍,比已报道的肠膜明串殊菌粗酶液比活(7.1 U/mg)提高了2.34倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜岷	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	110	901	15.0	22.0
2	马江锋	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	26	133	7.0	10.0
3	侯顾伟	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	4	22	3.0	4.0
4	隋姗姗	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	3	17	3.0	3.0
5	奚永兰	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	5	14	3.0	3.0