山核桃SRAP体系的建立及与RAPD和ISSR标记的比较

• 作者: 曾燕如 李元春 沈林
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 经济林学 山核桃 相关序列扩增多态性(SRAP) 随机扩增多态性DNA(RAPD) 简单序列重复区间(ISSR)
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 505-512
• 分类号: S664.1|S718.43
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0756.2011.03.025

摘要

以山核桃Carya cathayensis 基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应(PCR)体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应(SRAP-PCR)扩增体系,并筛选了引物.该体系(25.00μL)为:1×缓冲液0.20 mmol·L-1,脱氧核糖核苷酸(dNTPs),0.20μmol·L-1引物,2.00mmol·L-1镁离子(Mg2+),33.34 nkat Taq DNA聚合酶,0.80 mg·L-1基因组DNA(以上均为终浓度).反应条件为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸2 min,5个循环;94℃变性30 s,50℃退火30 s,72℃延伸2 min,30个循环;72℃延伸8 min,4℃保存,反应时间比其他体系缩短了一半.从100对引物中筛选出了适用于山核桃的引物15对.在山核桃中,随机扩增多态性DNA(RAPD),简单序列重复区间(ISSR),SRAP等3种标记,以SRAP标记每对引物扩增的位点数及每对引物扩增的多态性位点数为多,但SRAP多态性引物的比例、多态性位点比例居于另2种标记之间.在山核桃研究中可以考虑使用SRAP及RAPD标记.