猪传染性胃肠炎病毒S基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测

• 作者: 侯贝贝 崔保安 张云 张红英 王亚宾 胡慧 陈丽颖
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 实时荧光定量RT-PCR技术
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧、兽医、水产
• 页码范围: 521-525
• 分类号: S855.3
• 字数: 3822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2011.00521

摘要

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBRGreen I荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异性强、灵敏度高等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查.