Overlap PCR克隆黄牛脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA)及其原核表达

• 作者: 孙晓梅 张亚 朱金龙 蓝贤勇 陈宏 雷初朝
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄牛,脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA),原核表达,Overlap PCR
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1051-1055
• 分类号: S823
• 字数: 3867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.06.010

摘要

脂肪特异性磷脂酶A2基因(adipose-specific phospholipase A2,A dPLA)在脂肪组织甘油三酯水解过程中发挥着重要的调节作用,为了构建黄牛AdPLA基因原核表达系统,本研究通过Overlap PCR方法从黄牛(Bos taurus)基因组DNA中得到了AdPLA基因编码区全长,将其克隆到pGM-T载体上,阳性克隆经测序表明,与NCBI公布的序列(GenBank No.NM_001075280)完全一致.阳性质粒经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后,将其定向重组到pET28a(+)原核表达载体上,转化感受态大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.SDS-PAGE电泳表明,融合蛋白His-AdPLA在大肠杆菌中表达,证明成功构建了AdPLA基因原核表达系统,为进一步研究黄牛AdPLA基因的功能和AdPLA蛋白产品开发提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宏	西北农林科技大学动物科技学院	225	1718	19.0	31.0
2	朱金龙	西北农林科技大学动物科技学院	2	7	2.0	2.0
3	蓝贤勇	西北农林科技大学动物科技学院	53	334	9.0	16.0
4	雷初朝	西北农林科技大学动物科技学院	129	758	15.0	23.0
5	张亚	西北农林科技大学动物科技学院	4	13	2.0	3.0
6	孙晓梅	西北农林科技大学动物科技学院	3	11	2.0	3.0