家蚕具有CHCH结构域的蛋白家族基因BmCH的原核表达和亚细胞定位

• 作者: 张耀洲 梁莉惠 牛伟涛 舒建洪 郑青亮
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 CHCH保守结构域 基因克隆 荧光定量PCR Western blotting分析 细胞定位
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 238-245
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 5667字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2011.02.009

摘要

含有CHCH保守结构域的蛋白在不同物种中行使不同的功能.从家蚕蛹cDNA文库筛选获得一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其编码蛋白含有一个CHCH保守结构域,将该基因命名为BmCH(GenBank登录号:DQ443425.1).该序列开放阅读框大小为435bp,编码144个氨基酸残基.将成功构建的重组质粒pET-28a(+)-BmCH转化到E.coli Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导表达BmCH融合蛋白,用亲和层析进行纯化后,将融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.通过Western blotting检测BmCH在家蚕4个发育时期和5龄幼虫组织中的表达情况与用荧光定量PCR检测BmCH在家蚕不同发育时期及5龄幼虫组织中的转录结果基本一致:该蛋白在卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,其中在5龄幼虫期的表达量最高;该蛋白在5龄幼虫的表皮、精巢、中肠、丝腺和卵巢中有明显表达,在血淋巴、马氏管、脂肪体中的表达量较少,但差异不大,而在气管和头部没有表达.利用抗体的免疫荧光标记对BmCH在家蚕BmN细胞中的定位进行研究,观察到该蛋白主要分布在细胞质中.初步推测BmCH可能是家蚕生长发育的必需蛋白,参与多种细胞生命活动的过程.