PCV2衣壳蛋白肽段的表达及其血清抗体间接ELISA检测方法

• 作者: 刘湘涛 尚佑军 尹双辉 杨顺利 沈小燕
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 圆环病毒2型 可溶性表达 ELISA 抗体检测
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 1-7
• 分类号: S855.3
• 字数: 5412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2011.01.001

摘要

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcapELISA).将PCV2 cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化E.coli,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白.Western blotting试验证实该融合蛋白具有很强的免疫学活性,通过亲和层析柱对可溶性蛋白进行纯化.用融合表达的可溶性蛋白肽段作为抗原,建立猪圆环病毒(PCV2)血清抗体间接ELISA诊断方法.该方法的交义反应结果表明,重组抗原与PRRSV、CSF、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rhcap-ELISA和商品化的同类试剂盒(PCV2-Ab-Kit)检测137送检血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为79.56%和83.21%.因此,rhcap-ELISA猪圆环病毒抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合于在大规模的PCV2血清抗体的检测工作中使用.