三聚氰胺多克隆抗体的制备、分离纯化及ELISA方法的测试研究

• 作者: 严晟旻 张志善 李昊 沈晓妙 王浙峰 翁惠玲 饶平凡 高小尧 黄启龙
• 来源期刊: 中国食品学报
• 学科: 医学
• 关键词: 三聚氰胺 多克隆抗体 酶联免疫吸附 亲和层析 特异性
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 169-175
• 分类号: R392
• 字数: 4767字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7848.2011.05.027

摘要

目的:制备具有高特异性的三聚氰胺多克隆抗体,建立三聚氰胺快速检测方法.方法:通过抗原偶联嫁接技术,将不具备免疫原性的三聚氰胺与特定蛋白连接,制备免疫抗原(MB1st、MB2st、KM和ML2).对家兔进行皮下多点注射,初次免疫后取抗体血清,用SDS-PAGE检测血清中IgG的产生情况.采用酶联免疫吸附法测定各抗体血清的效价,最终以亲和层析法纯化血清,获得高特异性的抗体.将纯化后的抗体包被于酶标板上,建立三聚氰胺ELISA方法,并验证其有效性.结果:通过SDS-PAGE证明免疫前、后血清中IgG显著增长.进一步使用间接ELISA法测得各兔血清效价.MB1st免疫的效果最佳,其抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的36.97％上升至纯化后的75.57％.MB2st免疫的抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的30.80％上升至纯化后92.43％.KM免疫的抗体血清效价较低,其对三聚氰胺的竞争率由纯化前的11.95％上升至纯化后的96.09％.ML2免疫效价低,且其抗体血清在纯化前、后均对三聚氰胺没有显著的竞争性.由此建立ELISA方法,并初步验证了该方法的有效性.结论:本试验中制备的三聚氰胺抗体血清.经分离、纯化后得到对三聚氰胺具有较高竞争性的多克隆抗体,为建立酶联免疫方法,以检测食品中三聚氰胺含量提供了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李昊	福州大学生物工程研究所	21	123	6.0	10.0
3	严晟旻	福州大学生物工程研究所	3	16	3.0	3.0
4	高小尧	福州大学生物工程研究所	3	14	3.0	3.0
5	沈晓妙	福州大学生物工程研究所	3	16	3.0	3.0
6	张志善	福州大学生物工程研究所	2	10	2.0	2.0
7	翁惠玲	福州大学生物工程研究所	4	6	1.0	2.0
8	黄启龙		2	6	1.0	2.0
9	王浙峰	福州大学生物工程研究所	2	12	2.0	2.0