人胰岛素样生长因子1基因质粒载体的构建及其在人脐血源性神经干细胞中的表达

• 作者: 侯艳艳 吴值荣 朱登纳 王军 王留霞 陈海 高峰
• 来源期刊: 实用儿科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒pcDNA3.1 人胰岛素样生长因子1 转染 脐血 神经干细胞
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 页码范围: 448-451
• 分类号: R729
• 字数: 4066字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-515X.2011.06.021

摘要

目的 构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒表达载体,并观察重组体pcDNA3.1-IGF-1转染后的脐血源性神经干细胞(NSCs)中IGF-1基因的表达情况.方法 通过反转录-PCR(RT-PCR)方法从胎肝中提取IGF-1基因,胶回收方法分别纯化PCR产物(IGF-1基因)和质粒pcDNA3.1,二者分别由DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切后,经T4 DNA Ligase连接的方法将IGF-1基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1中,采用测序方法及DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1-IGF-1及空质粒pcDNA3.1分别转染至脐血源性NSCs内,经G418抗性筛选后,利用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测IGF-1基因在基因转染脐血源性NSCs内的表达情况.结果 IGF-1基因从胎肝中成功提取.重组体pcDNA3.1-IGF-1经基因测序及DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1构建正确.重组体经脂质体法转染脐血源性NSCs 24 h后,经G418筛选2周得到细胞抗性克隆,免疫细胞化学法检测到IGF-1基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中成功表达.RT-PCR方法检测到重组质粒pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中IGF-1 mRNA表达阳性,而空质粒pcDNA3.1转染的脐血源性NSCs中IGF-1 mRNA表达阴性.结论 IGF-1基因可在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs内成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王军	郑州大学第三附属医院小儿脑瘫康复治疗中心	176	811	12.0	18.0
2	高峰	河南省医药科学研究院神经免疫实验室	33	115	7.0	8.0
3	朱登纳	郑州大学第三附属医院小儿脑瘫康复治疗中心	76	389	11.0	14.0
4	陈海	郑州大学第三附属医院小儿脑瘫康复治疗中心	19	100	6.0	8.0
5	吴值荣	郑州大学第三附属医院小儿脑瘫康复治疗中心	6	28	3.0	5.0
6	侯艳艳	郑州大学第三附属医院小儿脑瘫康复治疗中心	5	26	3.0	5.0