结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建及其联合人IL-12表达质粒诱导的小鼠细胞免疫应答观察

• 作者: 丁珍珍 杜先智
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85A基因 DNA基因疫苗 人白细胞介素12质粒 联合免疫
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 15-19
• 分类号: R378.91+1
• 字数: 4701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.01.004

摘要

目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答.方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体PCDNA3.1的相应酶切位点.(2)动物实验:50只C57BL/6N小鼠随机分为:①Ag85A基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组);②重组Ag85A基因疫苗组;③卡介苗BCG组(阳性对照);④空载体组(阴性对照);⑤PBS组(空白对照).基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次,约0.3 ml/只.第三次免疫小鼠后28天,处死各组小鼠,分离脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-?、IL-2、IL-4水平;乳酸脱氢酶释放法检测脾细胞杀伤活性;分离的脾细胞经TB-PPD刺激后,XTT比色法检测脾淋巴细胞增殖活性.结果:(1)成功构建结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗.(2)联合免疫组能诱导较强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-r和IL-2水平显著高于Ag85A基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少;特异性CTL杀伤活性明显增强;淋巴细胞增殖活性也明显高于其他组别.结论:hlL-12表达质粒能够增强结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗所诱导的小鼠免疫应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜先智	重庆医科大学第二附属医院呼吸内科	69	272	8.0	12.0
2	丁珍珍	重庆医科大学第二附属医院呼吸内科	3	6	1.0	2.0