结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达

• 作者: 刘晓明 李武 王玉炯 邓光存
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85A Ag85B 共表达 Western blot
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 780-784
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91
• 字数: 880字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.08.010

摘要

目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉炯	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	108	671	13.0	20.0
2	邓光存	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	37	252	9.0	14.0
3	李武	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	9	20	2.0	4.0
4	刘晓明	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	13	8	2.0	2.0