携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘艳 叶秋萍 李君武 黄清华
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85B基因 globulin-1
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 页码范围: 1-4
• 分类号: Q786
• 字数: 2797字
• 语种: 中文

摘要

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404.以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1 载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中.重组质粒双酶切可见0.8 bp和10 kb的两条特异性条带,与预期大小相一致.重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致.成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础.