结核分枝杆菌Ag85A蛋白的原核表达、纯化和免疫反应性

• 作者: 付瑞玲 方正明 王春 王芳 石春薇 范雄林 邓毛子
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85A 原核表达 纯化 免疫反应性
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 117-121
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91
• 字数: 3210字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过原核表达获得结核分枝杆菌Ag85A蛋白.方法 用PCR从结核分枝杆菌1137Rv菌株中扩增出编码Ag85A的fbpA基因,克隆入原核表达载体pProEXHTb,产生重组质粒pPro85A后,转化至大肠杆菌感受态细胞BL21并诱导大量表达.用镍纯化系统纯化重组Ag85A蛋白,用不同分枝杆菌感染的小鼠血清通过ELISA确定其免疫反应性.利用PCR技术鉴定fopA基因在不同分枝杆菌的分布.结果 32 ku的Ag85A蛋白获得高效表达和纯化.表达Ag85A蛋白的fopA基因在结核分枝杆菌1137Rv、1-137Ra、BCG、草分枝杆菌、土地分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和次要分枝杆菌中均有表达,但在牝牛分枝杆菌中未表达.结核病患者和结核分枝杆菌毒株H37Rv感染小鼠血清所产生的抗Ag85A抗体滴度最高.结论 重组Ag85A蛋白已成功表达纯化,并保留了免疫反应性.