结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3的表达、纯化和鉴定

• 作者: 师长宏 杨巍 江鹰 赵佐庆 赵勇
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: Ag85B Hsp16.3 融合蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 953-956
• 分类号: R
• 字数: 3528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.10.017

摘要

目的 将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与Hsp16.3在大肠杆菌中融合表达并对其进行纯化和鉴定.方法 采用PCR方法 从质粒pProEX HTb-Hsp16.3扩增Hsp16.3基因,引入48bp的柔性linker结构以确保两蛋白的正确折叠.将目的 片段克隆至pMD18-T载体中进行测序.将测序正确的基因片段双酶切后,替换质粒pProEX HTa-Ag85B-ESAT6中的ESAT6基因,从而获得重组质粒pProEX HTa-Ag85B-Hsp16.3,并转化入大肠杆菌DH5α.经IPTG诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B多抗和抗Hsp16.3单抗以及活动期结核病人血清进行Western blot分析鉴定,采用镍柱亲合色谱法对融合蛋白进行纯化.结果 PCR扩增获得的目的 基因与GenBank报道的一致.SDS-PAGE分析显示构建的融合蛋白在大肠杆菌中表达,且该融合蛋白能够分别与抗Ag85B多抗和抗Hsp16.3单抗以及结核病人血清反应.该融合蛋白主要以包涵体的形式存在,镍柱亲和层析可获得纯化的Ag85B-Hsp16.3融合蛋白.结论 结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究其生物学功能提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师长宏	第四军医大学实验动物中心	145	694	13.0	16.0
2	赵勇	第四军医大学实验动物中心	74	352	10.0	14.0
3	赵佐庆	第四军医大学唐都医院实验外科	58	231	9.0	11.0
4	江鹰	第四军医大学实验动物中心	14	54	4.0	6.0
5	杨巍	第四军医大学实验动物中心	3	10	2.0	3.0