禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化

• 作者: 倪红波 刘思国 刘慧芳 司微 彭玮 杜艳芬 杨金国 林靖凯 王春来 王聃 赫明雷 赵海玲 赵福广
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因 重叠延伸剪接技术 重组表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 细菌
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: S852.618
• 字数: 2085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2009.02.010

摘要

为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因.采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B.将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测.检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65 ku.Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性.禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础.