结核分枝杆菌Ag85B与ESAT6融合蛋白的表达、纯化及抗原活性的初步研究

• 作者: 刘建利 师长宏 张海 赵勇 赵雷 靳亚平
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: Ag85B ESAT6 柔性链 融合蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 449-452
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91
• 字数: 3579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.05.013

摘要

目的 将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与ESAT6在大肠杆菌中融合表达,并对其进行纯化、鉴定和免疫学特性的初步研究.方法 采用PCR方法 从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增Ag85B和ESAT6基因,并在两基因中引入48bp的柔性linker结构,以确保两蛋白的正确折叠.将各目的 片段克隆至pMD18-T载体中进行测序.将测序正确的目的 基因片段双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EXHTa,得到重组质粒pPROEXHTa-Ag85B-ESAT6,并转化入大肠杆菌DH5α.经IPTG 诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B和抗ESAT6的mAb进行Western blot分析鉴定.通过镍柱对融合蛋白进行纯化.在PBS中通过透析恢复重组蛋白的天然结构,将复性融合蛋白与8例临床可疑结核病人血清进行ELISA测定.结果 PCR法扩增获得的各目的 基因片段与GenBank报道的一致.构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE 分析显示重组质粒在原核系统中得到了表达.融合蛋白能够分别与抗Ag85B和抗ESAT6的mAb反应.该融合蛋白主要以包涵体的形式存在,镍柱亲和层析纯化后得到了高纯度的Ag85B-ESAT6融合蛋白,并能够与结核病人血清发生反应.结论 结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-ESAT6在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究其免疫原性和保护性提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师长宏	第四军医大学实验动物中心	145	694	13.0	16.0
2	张海	第四军医大学实验动物中心	87	511	12.0	18.0
3	赵勇	第四军医大学实验动物中心	74	352	10.0	14.0
4	刘建利	西北农林科技大学动物医学院	5	42	3.0	5.0
6	靳亚平	西北农林科技大学动物医学院	73	447	12.0	18.0
7	赵雷	第四军医大学实验动物中心	2	15	2.0	2.0