结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化

• 作者: 吴少庭 张仁利 温见翔 秦莉 袁仕善 陈群 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 ESAT-6 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 39-42
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 2665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.01.010

摘要

目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白,并纯化.方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建pGEX-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌JM109;PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用谷胱甘肽-琼脂糖亲合层析法纯化融合蛋白.结果 PCR扩增出esat-6 288bp的基因,克隆到pMD18-T载体中,经测序与GenBank中序列一致;随后亚克隆到表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒,在JM109中表达了ESAT-6融合蛋白,表达的蛋白能被GST免疫血清识别;通过亲和层析纯化获得的蛋白能被结核病人血清识别.结论成功构建esat-6重组表达质粒,该质粒在JM109中表达ESAT-6融合蛋白,并获得较纯的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈群		120	747	15.0	20.0
2	张仁利		192	798	13.0	17.0
3	高世同		137	593	11.0	15.0
4	黄达娜		134	499	10.0	13.0
5	吴少庭		72	281	9.0	12.0
6	秦莉	华中科技大学同济医学院	20	82	6.0	8.0
7	袁仕善		20	86	5.0	8.0
8	温见翔		2	5	1.0	2.0