RNA干扰抑制土拨鼠肝炎病毒X基因表达

• 作者: 吴珺 孟忠吉 张永红 李东 柯昌征 汤守兵 陈悦
• 来源期刊: 湖北医药学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 土拨鼠肝炎病毒 土拨鼠肝炎病毒X蛋白 RNA干扰 小干扰RNA
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 475-479
• 分类号: Q785
• 字数: 3356字
• 语种: 中文

摘要

目的:研究土拨鼠肝炎病毒(WHY)序列特异性siRNA对WHVX基因表达的抑制作用.方法:以WHV全长质粒为模板PCR扩增WHVX基因,克隆到pXF3H载体构建WHX-HA融合蛋白真核表达质粒(pXF3HWHx)；合成siRNA的模板序列,克隆到siRNA表达质粒psiRNA构建shRNA表达质粒(psiWx1、psiWx2)；质粒pXF3 H-WHx与psiWx1、psiWx2共转染Hela细胞,Western blot检测WHV X蛋白的表达.结果:Hela细胞中WHVX蛋白的表达受siRNA的抑制,psiWx1表达的siRNA抑制90％以上的X蛋白表达,并呈剂量依赖性,但是WHV X基因靶位点中2个突变的核苷酸可使这种干扰作用消失.结论:质粒表达的siRNA序列特异性抑制WHV X蛋白的表达.