人源化抗肾小球基底膜抗体的单链抗体scFv3的原核表达及鉴定

• 作者: 刘章锁 王沛 王雅楠 肖静 赵国强
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗GBM抗体 单链抗体scFv3 原核表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 50-53
• 分类号: R392.11
• 字数: 3153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.01.012

摘要

目的:在原核细胞中构建并表达抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3,并鉴定其活性.方法:用PCR扩增抗GBM抗体单链抗体scFv3基因,将scFv3 DNA与pGEM-T Easy质粒连接,构建克隆载体pGEM-scFv3.用酶切后电泳鉴定构建载体的正确性;测序检测质粒重组后序列有无改变.再将scFv3亚克隆入表达载体pQE-80L,构建pQE80L-scFv3重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta2,酶切鉴定.IPTG诱导表达蛋白后,通过SDS-PAGE 和Western blot鉴定表达产物的抗体活性.结果:PCR扩增scFv3 DNA片段约为750 bp,与预期结果相同;克隆载体pGEM-scFv3酶切后显示scFv3成功的克隆入pGEM-T Easy质粒;测序验证插入片段全序列无改变;表达载体pQE80L-scFv3酶切图谱与预期相同;SDS-PAGE显示,在分子量约为27 kD处可见目的蛋白带,Western blot证实scFv3能与抗GBM抗体结合.结论:成功构建并表达了抗GBM抗体的单链抗体scFv3蛋白,为进一步研究scFv3的生物学特性和基因工程抗体的制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵国强	郑州大学微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
2	刘章锁	郑州大学第一附属医院肾内科	260	1365	15.0	28.0
3	王沛	郑州大学第一附属医院肾内科	63	291	8.0	15.0
4	肖静	郑州大学第一附属医院肾内科	55	186	8.0	11.0
5	王雅楠	郑州大学第一附属医院肾内科	3	4	1.0	2.0