打顶烟草根尖组织抑制性消减cDNA文库的构建及其序列分析

• 作者: 刘卫群 戚元成 王菲菲 马雷
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 烟碱 抑制性消减杂交(SSH) 反向Northern杂交 序列分析 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1331-1337
• 分类号: S572
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.07.004

摘要

[目的]构建烟草打顶后根尖组织的消减文库,寻找调控烟碱生物合成的相关候选基因.[方法]以打顶株为测验子(tester)、以非打顶株为驱赶子(driver),利用抑制性消减杂交(suppression subtractivehybridization,SSH)和反向Northern杂交技术构建和筛选烟草打顶前后根尖组织消减文库,并对差异表达克隆进行生物信息学分析.[结果]构建了具有高消减效率的cDNA文库.PCR验证消减文库阳性克隆的插入片段为200-1 000 bp.经反向Northern杂交,从850个克隆中筛选到560个杂交信号差异明显的克隆,测序后得到273条有效序列.对273个已知功能基因的ESTs进行分类,生物碱合成类占4%、植物激素代谢类占3%、信号转导和转录因子类占18%、胁迫和防御类占32%、蛋白质代谢占9%,碳代谢占6%、其它代谢占15%,功能未知类占13%.RT-PCR结果显示,NTAT84和NTAT71序列在烟株打顶后转录活性均升高.[结论]应用SSH技术构建了烟草打顶前后根尖组织消减cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘卫群	河南农业大学烟草学院	94	1777	23.0	39.0
5	戚元成	河南农业大学烟草学院	64	533	11.0	20.0
9	王菲菲	河南农业大学生命科学学院	18	37	4.0	5.0
10	马雷	河南农业大学烟草学院	4	7	2.0	2.0