脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 尹一兵 徐绣宇 王虹 王鹏 胥文春 黄健 黄美容
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂蛋白相关磷脂酶A2 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 诊断制品
• 页码范围: 460-463
• 分类号: Q786|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)基因重组原核表达质粒,表达重组蛋白,制备人LP-PLA2多克隆抗体.方法 从分化的THP-1细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增LP-PLA2全长编码基因,插入原核表达载体pCold TF中,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG低温(15℃)诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Sepharose 6FF亲和层析及DEAE-Sephadex离子交换层析后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot法检测多抗的反应原性.结果 重组表达质粒pCold TF-LP-PLA2经双酶切及测序证实构建正确;TF-LP-PLA2获得可溶性表达,相对分子质量约为93 000;纯化的重组蛋白纯度可达90%,可与市售兔抗人LP-PLA2抗体反应;制备的抗血清效价达1:5.12×106以上,反应原性良好.结论 已成功原核表达了重组LP-PLA2蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为下一步制备单克隆抗体及建立LP-PLA2免疫检测方法奠定了基础.