b型流感嗜血杆菌D蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 张华捷 张庶民 杜倩 王一飞
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜血菌,流感,b型 hpd基因 克隆,分子 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 418-420,425
• 分类号: R378.4+1|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆b型流感嗜血杆菌(Haemophlilus influenza type b,Hib)D蛋白(hpd)基因,原核表达并纯化重组hpd蛋白,为下一步开发以D蛋白为基础的结合疫苗奠定基础.方法 从Hib CMCC株基因组DNA中PCR扩增hpd基因片段,克隆入载体pET-30a(+),构建重组原核表达质粒pET-30a-hpd,转化入感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经6mol/L尿素变性、DEAE阴离子交换柱纯化、透析复性后,采用Western blot法鉴定其反应原性.结果 重组表达质粒DET-30a-hpa经PCR及测序证明构建正确;表达的重组蛋白以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的40%;经一步过柱纯化可得到纯度达95%左右的重组蛋白;纯化的重组蛋白可与Hib免疫小鼠制备的抗血清发生特异性反应.结论 已成功克隆了Hib hpd基因,并在大肠杆菌中表达了重组hpd蛋白,为下一步开发以D蛋白为基础的结合疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张庶民	中国药品生物制品检定所血清室	79	373	11.0	16.0
2	张华捷	中国药品生物制品检定所血清室	4	7	2.0	2.0