人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)表达及抗体制备

• 作者: 冷雪 刘晓华 弓景波 战锐 杲修杰 武磊 王剑波 王新兴 赵云 钱令嘉
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶 克隆 表达 抗体纯化 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 35-38
• 分类号: R543
• 字数: 3673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.01.009

摘要

目的 重组表达及纯化人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(betaine-homocysteine methyltransferase, BHMT)蛋白,制备BHMT多克隆抗体并对其性质进行研究.方法 TRizol法提取人HepG2细胞总RNA,RT-PCR获得BHMT基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,构建重组表达载体pET-28a-BHMT,经0.5 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物通过Ni柱亲和纯化获得重组蛋白;以重组BHMT蛋白免疫兔,获得兔多克隆抗体,并对抗体进行纯化,应用Western印迹方法分析其识别人天然BHMT蛋白的能力.结果 经测序证明,RT-PCR得到的人BHMT基因与GenBank中人的BHMT基因完全一致;构建的BHMT原核表达载体可稳定地表达可溶性人BHMT蛋白;重组BHMT蛋白免疫兔后,兔血清抗体纯化获得高纯度BHMT抗体,此抗体可以特异性地识别人肝癌组织中的天然BHMT蛋白.结论 成功重组表达并纯化人BHMT蛋白,所获得的BHMT多克隆抗体可以应用于人BHMT蛋白的检测,为研究BHMT在高同型半胱氨酸血症中的作用机制奠定基础.