一种S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法

• 作者: 谭晓军 谷劲松
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: S-腺苷-L-高半胱氨酸 S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶 S-核糖基高半胱氨酸酶 S-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶 酶偶联分析
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 有机化学
• 页码范围: 521-525
• 分类号: O629|Q5-3
• 字数: 2933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0251-0790.2012.03.017

摘要

通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被SAHN酶水解生成腺嘌呤和S-核苷高半胱氨酸,后者进一步被SRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman's试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭晓军	济南大学医学与生命科学学院	25	87	5.0	9.0
3	谷劲松	济南大学医学与生命科学学院	14	49	3.0	6.0