利用分枝杆菌的重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌的方法研究

• 作者: 万康林 夏强 赵丽丽 赵秀芹
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 重组工程系统 pJV53质粒 串联亲和纯化标签 敲入片段 重叠PCR 耻垢分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 539-542,546
• 分类号: R378.911
• 字数: 3303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.06.019

摘要

目的 利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组.方法 将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5'端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3'端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果.结果 重叠PCR技术得到全长为3 200 bp的敲入片段,PCR与DNA测序结果 证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中.结论 成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的 基因功能研究奠定了基础.