小鼠胰岛素诱导基因1siRNA稳定表达细胞株的建立及其对细胞胆固醇代谢的影响

• 作者: 李桂琼 柯大智 莫显刚 邓玮 陈庆伟
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素诱导基因1 siRNA RAW264.7细胞 胆同醇 代谢
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1445-1449
• 分类号: Q789|Q591.5
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1 (insulin induced gene 1,insig1 )siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响.方法 根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入pGenesil-1质粒,构建insig1 shRNA真核表达质粒,测序鉴定后,脂质体法转染RAW264.7细胞,筛选干扰效果最佳的质粒,将其转染入RAW264.7细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中insig1基因的转录水平及蛋白的表达水平,油红O染色观察转染细胞中胆固醇含量的变化.结果 酶切及测序结果证实,insig1基因shRNA表达质粒构建正确,其中si-2为干扰效果最佳的质粒；在稳定转染的RAW264.7细胞中,si-2组insig1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较阴性质粒组和未转染组明显降低(P＜0.05),油红O颗粒含量最多.结论 成功建立了insig1 siRNA稳定表达细胞株,体外模型证明了对insig1基因的干扰可促进细胞胆固醇摄取.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈庆伟	重庆医科大学附属第二医院老年病科	95	910	16.0	26.0
2	李桂琼	重庆医科大学附属第二医院老年病科	35	305	9.0	16.0
3	柯大智	重庆医科大学附属第二医院老年病科	41	460	9.0	20.0
4	邓玮	重庆医科大学附属第二医院老年病科	37	326	9.0	17.0
5	莫显刚	重庆医科大学附属第二医院老年病科	8	43	4.0	6.0