siRNA沉默抗原递呈细胞表面CD86的表达对T淋巴细胞激活的影响

• 作者: 孙杰 邱玉华 郭静雅 高增燕 黄莉
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD86 siRNA 免疫耐受 共刺激分子
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 681-685,695
• 分类号: R392.11
• 字数: 4773字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.08.002

摘要

目的:通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APC)表面共刺激分子CD86的表达,分析其对T细胞增殖和白介素10及IFN-γ分泌的影响,为移植排异和自身免疫性疾病的治疗提供新的思路和方法.方法:设计并通过化学方法合成三对针对人CD86 mRNA的siRNA片段(siRNA-1、2、3),脂质体法转染人B淋巴瘤Raji细胞;转染24、48、72小时后,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测Raji细胞表面CD86蛋白水平的表达;荧光定量PCR方法检测CD86mRNA水平的表达;分别采用siRNA抑制Raji细胞表面CD86分子的表达、抗人CD86单克隆抗体封闭CD86分子以及二者的联合来阻断CD86-CD28信号通路、MTT和ELISA方法分别检测CD86信号通路被抑制后对T细胞增殖和细胞因子IL-10及IFN-γ分泌的影响.结果:FCM结果显示,Raji细胞表面天然表达CD86的阳性率约为98.0%;转染siRNA后24小时时,仅siRNA-2组表现较为明显的抑制效应,此时细胞表面CD86的阳性表达率约为61.7%,抑制率为37.0%;转染后48小时,control和siRNA-1组Raji细胞表面CD86的表达仍没有变化,而siRNA-2组CD86的表达下降至39.6%,抑制率为59.6%,siRNA-3组CD86的表达下降至72.6%,抑制率为25.9%;siRNA转染后72小时,各组Raji细胞表面CD86的表达均有不同程度的变化,分别为:control组,90.4%;siRNA-1组,83.1%;siRNA-2组,15.2% 和siRNA-3组,46.2%;各组的抑制率依次为7.6%,15.2%,84.5% 及52.8%.荧光定量PCR结果显示,转染后72小时,仅siRNA-2和siRNA-3组CD86 mRNA水平的表达与Raji细胞相比有显著差异,抑制率分别为78.7%和45.9%.CD86的表达被siRNA-2抑制后,可抑制Raji细胞对T细胞的活化、增殖和IL-10及IFN-γ的分泌;抗人CD86单克隆抗体同样可以抑制Raji细胞对T细胞的激活;并且siRNA-2和抗人CD86单克隆抗体对T细胞的活化抑制具有协同效应.结论:通过siRNA沉默抗原递呈细胞表面共刺激分子CD86的表达,从而阻断CD86/CD28共刺激信号通路,可有效抑制T淋巴细胞的活化、增殖及细胞因子IL-10、IFN-γ的分泌,由此削弱了T细胞应答来诱导免疫耐受.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱玉华	苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系	89	426	11.0	15.0
2	孙杰	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	48	339	10.0	16.0
3	黄莉		59	345	11.0	16.0
4	高增燕	苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系	2	10	2.0	2.0
5	郭静雅	苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系	7	39	4.0	6.0