鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗NDV活性

• 作者: 代丽 单安山 孙进华 尹佳佳 李远见
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡γ-干扰素 克隆 可溶性表达 病毒活性
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 37-42
• 分类号: S826
• 字数: 5681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2011.09.008

摘要

将鸡γ-干扰素(chIFN-γ)基因先克隆,接着通过大肠杆菌表达后进行产物纯化与活性检测.通过PCR方法以带有信号肽的重组质粒PMD-18T-preIFN-γ为模板,扩增无信号肤chIFN-γ基因片段,克隆至原核表达载体pProEXTM HTa,构建重组表达质粒pProEXTM HTa-chIFN-γ,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,然后利用Novagen蛋白纯化试剂盒进行天然纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定,同时利用CEF-NDV系统测定抗病毒活性.结果表明,459bp的chIFN-γ成熟蛋白编码基因被成功克隆,同时chIFN-γ蛋白在大肠杆菌中也获得了成功表达,分子质量约为20 ku,能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应.表达蛋白一部分形成包涵体,另一部分以可溶形式存在,可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率约为1.9 mg· mL-1.生物学活性试验表明,1∶54稀释纯化的重组chIFN-γ( rchIFN-γ)孵育CEF细胞后能抵抗100TCID50的NDV(新城疫Ⅳ系弱毒苗)攻击.研究纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性,为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单安山	东北农业大学动物营养研究所	373	4210	32.0	45.0
2	尹佳佳	东北农业大学动物营养研究所	5	12	3.0	3.0
3	孙进华	东北农业大学动物营养研究所	29	135	6.0	10.0
4	代丽	东北农业大学动物营养研究所	4	16	3.0	4.0
5	李远见	东北农业大学动物营养研究所	2	13	2.0	2.0