体外拼装苦瓜降糖多肽P基因

• 作者: 张文姬 王富军 王碧莲 赵健 郭茸恺
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因拼装 苦瓜降糖多肽P 聚合酶链反应 密码子偏爱性
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 94-98
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 以苦瓜降糖多肽P基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法.方法 根据已知苦瓜降糖多肽P的蛋白序列和大肠杆菌的密码子偏爱性,反向翻译出可在大肠杆菌内表达的苦瓜降糖多肽P基因,设计24条40 bp的降糖多肽P基因寡核苷酸片段引物,通过PCR进行寡核苷酸片段的扩增和拼装.将拼装好的多肽P基因的cDNA与pET-32a载体连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA纯化后检测其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠的降糖活性.结果 苦瓜降糖多肽P基因经2轮PCR扩增后,即可见目的 条带;经第3轮PCR扩增,即可见清晰的目的 条带.经测序鉴定,与设计的降糖多肽P基因序列完全一致.重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,且可与鼠抗His单抗发生特异性反应.纯化的融合蛋白纯度达90%以上,产量为10 mg/L,其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠具有降糖活性.结论 体外基因拼装法是一种有效获取目的 基因的方法,可进行密码子偏爱性设计,在宿主系统中有效表达目的 基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵健	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	58	146	4.0	9.0
2	郭茸恺	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	2	10	2.0	2.0
3	王富军	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	3	2	1.0	1.0
4	张文姬	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	2	1.0	1.0
5	王碧莲	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	2	1.0	1.0