幽门螺杆菌HpaA蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

• 作者: 叶翠莲 姜和 王颖 蔡家利 邱容蓉 邹姝姝
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HpaA 螺杆菌,幽门 抗体,单克隆
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 83-87
• 分类号: R378|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 制备幽门螺杆菌(H.pylori)HpaA蛋白单克隆抗体,并检测其对H.pylori黏附胃腺癌细胞AGS的抑制作用.方法 应用PCR法扩增HpaA基因,构建重组表达质粒pQE30-HpaA,表达并纯化重组HpaA蛋白;以其为抗原免疫BALB/c/小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,采用间接ELISA和Western blot法检测单抗的特异性,间接ELISA检测细胞株培养上清和腹水抗体效价,并对其进行亚型鉴定和杂交瘤细胞株稳定性分析;扫描电镜观察重组HpaA蛋白单抗对H.pylori黏附AGS细胞的抑制作用.结果 重组表达质粒pQE30-HpaA经双酶切、PCR及测序证明构建正确;表达的重组HpaA蛋白相对分子质量约为30000,可溶性蛋白含量约占65%,纯化后纯度达85%以上;经细胞融合及筛选克隆获得了2株能稳定分泌抗HpaA单抗的杂交瘤细胞株,2株单抗与其他肠道细菌均无交叉反应,能与H.pylori全菌体发生特异性反应;乳胶凝集试验证明,该单抗属IgG3、κ型;2株单抗细胞培养液的抗体效价分别为1:128～1:256和1:64～1:128,腹水抗体效价分别可达1:6400～1:12800和1:1600～1:3200;杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体;单抗可抑制H.pylori对AGS细胞的黏附作用.结论 已成功制备了H.pylori HpaA蛋白单克隆抗体,为建立新的H.pylori现症感染诊疗方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡家利	重庆理工大学药学与生物工程学院	37	96	5.0	6.0
2	王颖	重庆理工大学药学与生物工程学院	18	52	4.0	6.0
3	姜和	重庆理工大学药学与生物工程学院	14	75	4.0	8.0
4	叶翠莲	重庆理工大学药学与生物工程学院	6	5	2.0	2.0
5	邹姝姝	重庆理工大学药学与生物工程学院	9	33	4.0	5.0
6	邱容蓉	重庆理工大学药学与生物工程学院	1	2	1.0	1.0