重组pEGFP-Mfn2真核表达载体的构建及转染人乳腺癌细胞系MCF-7

• 作者: 姜广健 张景华 汪萍 石鹏 胡万宁 胡继卫 陈晶晶 马杰
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 Mfn2 分子克隆 DNA测序 多聚酶链反应 MCF-7 免疫细胞化学
• 年，卷（期）: 2011,（22）
• 所属期刊栏目: 临床基础研究/论著
• 页码范围: 1774-1778
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文

摘要

目的:构建Mfn2基因真核表达载体,将此载体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7,并观察高表达Mfn2对MCF-7增殖的影响.方法:1)设计pEGFP-Mfn2质粒,并将其用脂质体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7； 2)DNA测序、RT-PCR法、流式细胞术及免疫细胞化学法鉴定以上述载体是否转染成功；3)MTT法检测转染后Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响.结果:1)重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入小鼠Mfn2的全长编码基因,DNA序列测定的结果与预期设计基本一致.普通PCR琼脂糖凝胶电泳显示转染后MCF-7细胞中存在外源性Mfn2的表达.2)琼脂糖凝胶电泳检测显示实验组中Mfn2较对照组明显升高,转染Mfn2后MTT法检测转染pEGFP-Mfn2组的MCF-7细胞数明显低于空白对照组与转染pEGFP-N1组,P＜0.05.3)细胞免疫化学显示转染Mfn2后MCF-7细胞数目减少,癌细胞出现核碎裂现象.结论:成功构建了Mfn2基因真核表达载体,并成功转染MCF-7细胞.转染Mfn2后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪萍	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	5	77	4.0	5.0
2	张景华	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	44	263	8.0	14.0
3	胡万宁	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	63	290	10.0	14.0
4	马杰	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	9	26	3.0	4.0
5	胡继卫	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	5	14	2.0	3.0
6	陈晶晶	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	3	15	2.0	3.0
7	姜广健	唐山市人民医院肿瘤医院肿瘤科	1	8	1.0	1.0