人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达

• 作者: 张徐 房新建 方莉莉 许文林 钱晖 陈巧云 陈琛
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CD44 多药耐药 侵袭 乳腺癌
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 102-106,110
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2|R737.9
• 字数: 4820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2009.02.003

摘要

目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱晖	江苏大学基础医学和医学技术学院	88	346	9.0	14.0
2	许文林	江苏大学附属人民医院中心实验室	61	265	8.0	11.0
3	陈巧云	江苏大学附属人民医院中心实验室	33	140	7.0	10.0
4	陈琛	江苏大学附属人民医院中心实验室	12	44	4.0	6.0
5	房新建	江苏大学附属人民医院中心实验室	8	30	4.0	5.0
6	张徐	江苏大学基础医学和医学技术学院	27	108	7.0	9.0
7	方莉莉	江苏大学附属人民医院中心实验室	6	36	4.0	6.0