福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能性表达

• 作者: 刘德武 吴珍芳 黄妙容
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 福寿螺 多功能纤维素酶 原核表达 真核表达 酶活测定
• 年，卷（期）: 2011,（17）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 3641-3648
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.017

摘要

[目的]克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析.[方法]通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织总RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx序列,连接克隆载体pMD18-T,再通过EcoR Ⅰ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体pET-32a(+)及pcDNA3.1(+)连接,构建原核、真核表达载体,并在E.coli BL-21 (DE3)和猪肾细胞PK15中进行表达,最后采用DNS法测定表达产物酶学活性.[结果]RT-PCR扩增得到1 326 bp的序列,包括1 185 bp的编码序列和部分侧翼序列,编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因cDNA序列相似性为99％,氨基酸序列相似性为100％.原核细胞表达产物经包涵体复性后,对羧甲基纤维素钠、2-羟乙基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、木聚糖的水解活性分别为:24.78、15.67、18.42、600.91和175.43 U·mg-1;而在PK15细胞中重组酶对以上5种底物的活性分别为:0.84、0.78、1.01、14.62和4.23 U·mL-1.[结论]克隆出了福寿螺多功能纤维素酶基因,并能在大肠杆菌和哺乳动物细胞中成功地表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘德武	华南农业大学动物科学学院	79	381	11.0	17.0
2	吴珍芳	华南农业大学动物科学学院	56	312	9.0	15.0
3	黄妙容	华南农业大学动物科学学院	2	10	2.0	2.0