真核表达载体pEGFP-N2/AT2R的构建及其在原代血管平滑肌细胞的表达

• 作者: 刘建平 左玉梅 王媛
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 血管紧张素Ⅱ2型受体基因 克隆 原代血管平滑肌细胞 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 940-943
• 分类号: R394-33|R322.12|R394.2
• 语种: 中文

摘要

目的 体外构建携带血管紧张素Ⅱ2型受体(ANG Ⅱ Type 2 Receptor,AT2R)基因的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中的表达.方法 以pUHD-10.3/AT2R质粒为模板,PCR扩增AT2R基因的全长cDNA序列,再将其克隆人载体pEGFP-N2,构建其真核表达载体pEGFP-N2/AT2R.以基因转染技术,将AT2R导入原代VSMCs.倒置荧光显微镜观测转染后VSMCs生长变化及AT2R在其中的表达等情况.图像分析技术检测AT2R在VSMCs中的转染效率.Western blot检测转染AT2R基因的VSMCs表达其编码蛋白.RT-PCR法对AT2R基因修饰的VSMCs进行鉴定.结果 成功构建AT2R基因的真核表达载体pEGFP-N2/AT2R,该真核载体能携带AT2R基因转染并有效表达于VSMCs,其转染效率约40%,RT-PCR及Western blot均可检测到AT2RmRNA及蛋白在血管平滑肌细胞中高表达.结论 成功地将克隆到的AT2R基因克隆入pEGFP-N2载体中,并实现了AT2R基因在原代VSMCs的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王媛	第三军医大学训练部教务处	11	58	4.0	7.0