mTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

• 作者: 刘戈飞 刘程伟 张强 张志深 杨军 胡新华
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 雷帕霉素靶蛋白 反义技术 基因表达载体
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 337-339
• 页数: 3页
• 分类号: Q753
• 字数: 2631字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0258-4646.2006.04.001

摘要

目的:构建哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响.方法:提取人VSMC总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,构建mTOR基因反义RNA真核表达载体.转染VSMC,采用Westem blot法检验反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达,VSMC的分裂、增殖过程受阻.结论:已经成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨军	中国医科大学附属第一医院血管外科	398	1853	18.0	26.0
2	胡新华	中国医科大学附属第一医院血管外科	58	302	9.0	14.0
3	张强	中国医科大学附属第一医院血管外科	150	996	12.0	26.0
4	张志深	中国医科大学附属第一医院血管外科	15	46	4.0	6.0
5	刘程伟	中国医科大学附属第一医院血管外科	13	40	4.0	6.0
6	刘戈飞	中国医科大学附属第一医院血管外科	19	144	7.0	11.0