pLC3-EGFP真核表达载体的构建与表达

• 作者: 李小玲 龙鼎新
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 自噬 LC3 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2011,（36）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4483-4486,4492
• 页数: 5页
• 分类号: Q25|Q78
• 字数: 2654字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人微管相关蛋白轻链3(LC3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达载体(pLC3-EGFP)并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础.方法 应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定.将表达质粒pLC3 -EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,westem blot检测LC3-EGFP蛋白的表达.结果 测序结果表明,从人胚肾HEK293T细胞中所获得的LC3 cDNAs含有378个碱基,与Genbank( NM 022818)序列完全一致.构建的重组真核表达载体pLC3-EGFP经鉴定证实LC3基因已完全正确亚克隆到pEGFP--N3；LC3-EGFP融合蛋白能够在HEK293T细胞中表达,并主要定位于细胞质中.结论 成功构建具有报告基因-增强绿色荧光蛋白基因的重组真核表达载体pLC3-EGFP并在HEK293T细胞中很好地表达,实验结果为研究细胞自噬的进程及机制提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙鼎新	南华大学公共卫生学院预防医学系	76	328	11.0	15.0
2	李小玲	南华大学公共卫生学院预防医学系	20	107	6.0	10.0