重组抗血小板多肽在Cos-7细胞中的表达、纯化和活性检测

• 作者: 伍严安 林皓平 蔡鹏威 郭延松
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗血小板多肽 基因克隆 Cos-7细胞 血小板凝聚仪 流式细胞仪
• 年，卷（期）: 2011,（30）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3754-3757,3762
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 字数: 4296字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆并在Cos-7细胞中表达有活性的抗血小板多肽.方法 合成编码抗血小板多肽赖氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(KGD)的核苷酸序列并克隆于pCDNA3.1/myc-hisB载体,构建重组表达载体pcD -NA3.1-KGD.以lipofectamine 2000将重组表达载体转染Cos-7细胞,G418筛选抗性细胞克隆.裂解细胞并抽提胞内蛋白,采用融合表达的myc多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白的表达.大量扩增高表达KGD融合蛋白的抗性细胞克隆,ProBondTM系统纯化KGD融合蛋白.应用血小板凝聚仪和应用流式细胞仪测定KGD多肽抗血小板活性.结果 成功构建KGD表达载体pcDNA3.1-KGD,该载体转染Cos-7细胞经G418筛选获得5株抗性细胞克隆,Western blot显示其中2株细胞很好表达KGD融合蛋白.ProBond试剂纯化KGD融合蛋白,获得纯度为94.6％的融合蛋白.KGD均能通过占据GPⅡb/Ⅲa受体而抑制血小板聚集.结论 在Cos-7细胞中可大量表达并获得高纯度有活性的抗血小板多肽KGD融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林皓平		6	9	2.0	3.0
2	伍严安		60	193	7.0	11.0
3	郭延松		13	19	2.0	3.0
4	蔡鹏威		26	122	7.0	10.0