人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定

• 作者: 周鹤峰 姬可平 葛正龙 邵敏
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人单链白细胞介素12 大肠杆菌 生物学活性 表达
• 年，卷（期）: 2011,（31）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3124-3126
• 分类号: R1
• 字数: 2792字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2011.31.002

摘要

目的 构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12.方法 PCR法从质粒pCA13- hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性.结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段.表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ.结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鹤峰	遵义医学院珠海校区生物工程系	31	130	6.0	10.0
2	邵敏	遵义医学院珠海校区生物工程系	31	107	6.0	9.0
3	葛正龙	遵义医学院生物化学教研室	78	273	9.0	11.0
4	姬可平	遵义医学院珠海校区生物工程系	20	85	5.0	9.0