Panton-Valentine杀白细胞素原核表达、纯化及生物学活性鉴定

• 作者: 周文静 周馨 常文娇 张翠萍 戴媛媛 沈继龙 马筱玲 高朋
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 杀白细胞素类/遗传学 基因表达 细胞凋亡 葡萄球菌,金黄色
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 6-10
• 分类号: R341|R378.11|R394.2|R394.3
• 字数: 4076字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.01.002

摘要

目的 原核表达金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)蛋白,并进行生物学活性鉴定.方法 提取PVL阳性金黄色葡萄球菌DNA,利用PCR扩增LukF-PV和LukS-PV编码基因,亚克隆入表达载体pET28a,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21株,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后获得可溶性的蛋白,Western blot对其鉴定.并以人多形核粒细胞(PMNs)为靶细胞检测其生物学活性.结果 成功构建了LukF-PV 和LukS-PV 基因的表达载体,经IPTG诱导和亲和层析纯化法获得重组蛋白,Western blot鉴定证实其为重组PVL蛋白.实验表明该蛋白具有诱导人多形核粒细胞(PMNs)凋亡的作用.结论 成功地表达获得了具有生物学活性的PVL重组蛋白,为PVL快速检测方法的建立和致病机制研究奠定基础.