Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因的克隆、原核表达及初步鉴定

• 作者: 付广林 张义永 戴媛媛 李华 沈继龙 马筱玲 高玉录 鲁怀伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 杀白细胞素类/遗传学 基因表达 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: R341|R345.79|R378.11|R394.2|R394.3
• 字数: 2886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2008.05.005

摘要

目的 构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL) lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白.方法 提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体上,鉴定并转化至Rosetta(DE3)plys表达宿主菌中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定.结果 构建了lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重组质粒,经PCR扩增和限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切均得到939bp的目的 片段,基因测序与GENEBANK中的PVL的序列一致,宿主菌表达带HIS标签的重组LukS-PV蛋白.结论 成功克隆lukS-PV基因和构建重组表达质粒,并在宿主菌中成功表达重组LukS-PV蛋白,为PVL免疫学检测方法的建立奠定基础.