介导EGFR siRNA转染肝癌HepG2细胞的试剂筛选及条件优化

• 作者: 党裔武 罗殿中 陈罡
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 表皮生长因子受体 小干扰RNA 基因转染介质 肝癌细胞
• 年，卷（期）: 2011,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-20
• 分类号: R735.7
• 字数: 2303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.18.011

摘要

目的 筛选介导表皮生长因子受体(EGFR)小干扰RNA( siRNA)转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件.方法 设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h.实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比.测算转染后细胞存活率及转染率.结果 Lipofectamine 2000、siPORT Amine及 combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%.2 μl的 combiMAGnetofection及200 nM的 EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高 (90%±1%),其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%.结论 介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2 μl的combiMAGnetofection、200 nM的 EGFR siRNA、转染72 h.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈罡		174	613	11.0	15.0
2	罗殿中		132	673	12.0	18.0
3	党裔武		68	332	9.0	14.0