克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

• 作者: 刘光明 曹敏杰 林江伟 沈海旺 游洪燕 蔡秋凤
• 来源期刊: 集美大学学报：自然科学版
• 学科: 生物学
• 关键词: 克氏原螯虾 原肌球蛋白 过敏原 过敏原性
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 水产科学与生物工程
• 页码范围: 167-174
• 页数: 8页
• 分类号: Q512
• 字数: 5477字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7405.2012.03.002

摘要

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析，确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质，以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin，TM）多克隆抗体的Western—blotting分析，确定该蛋白质为TM．同源性分析表明，克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示，它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示，纯化TM不易被胃蛋白酶降解，易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解，进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示，其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性，且蒸煮处理时间越长，效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．