慢病毒介导shRNA干扰颗粒体蛋白前体(GRN)促进猪前体脂肪细胞分化

• 作者: 史新娥 宋子仪 张振宇 李新建 杨公社 杨浩 程佳 蒲蕾
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 颗粒体蛋白前体(GRN) RNA干扰 慢病毒 前体脂肪细胞 猪
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 599-605
• 分类号: S852.2
• 字数: 4445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.06.002

摘要

为研究颗粒体蛋白前体(granulin,GRN)在脂肪细胞发育过程中的作用,本实验构建了GRN短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,包装并感染猪前体脂肪细胞,采用油红O染色、油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化情况,采用Real-time PCR法检测成脂关键基因mRNA的表达变化情况.结果显示,GRN慢病毒干扰载体病毒滴度在5×107 TU/mL以上,病毒感染前体脂肪细胞后显著降低了GRN的表达,shRNA2干扰效率最高,达到76％,沉默GRN后能够促进猪前体脂肪细胞分化；脂肪细胞分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节原件结合蛋白(SREBP-1c)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(ap2)和脂蛋白酯酶(LPL)基因mRNA表达量均升高.结果表明,降低GRN基因表达促进了猪前体脂肪细胞分化,揭示GRN在猪前体脂肪细胞分化过程中可能起到抑制作用.