重组肠激酶融合蛋白纯化工艺的研究

• 作者: 申文捷 马玉杰
• 来源期刊: 中国卫生工程学
• 学科: 生物学
• 关键词: 融合蛋白 肠激酶 包涵体 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 459-462
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 研究建立重组肠激酶融合蛋白纯化工艺的方法.方法 利用大肠杆菌发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,超声破碎法破碎菌体,离心后收集包涵体.6 mol盐酸胍、5 mmol EDTA溶解包涵体,在胱氨酸存在的情况下,以脉冲方式复性.经IMAC层析及DEAE层析纯化,复性的融合蛋白做酶切实验.结果 融合蛋白复性在5 mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03 mg/ml和复性终蛋白浓度0.3 mg/ml为最佳复性方案.经IMAC层析及DEAE层析纯化,rEKL纯度可达90％以上.每升发酵液经复性及纯化后,可得rEKL 60 mg以上.结论 实现了大规模生产rEKL的目的,使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马玉杰		1	0	0.0	0.0
2	申文捷		1	0	0.0	0.0