hPlk2基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

• 作者: 付勤 巴根 李妍 杨礼庆 梁爽 沈涛 许晓军
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人Polo样激酶2 Western blot 绿色荧光蛋白 质粒构建
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 162-165
• 分类号: Q291|Q786|Q591.2
• 字数: 2525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2012.02.009

摘要

目的:构建人Polo样激酶2(hPlk2)真核表达载体并证实该融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法:提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hPlk2基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中.然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.最后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hPlk2在COS-7细胞内的定位.结果:hPlk2基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为2058bp,并测序成功.Western blot检测到了pEGFP-hPlk2融合蛋白表达,分子量约为105kDa.pEGFP-hPlk2在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.结论:成功构建了hPlk2基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk2蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈涛	中国医科大学附属盛京医院骨科	27	129	5.0	11.0
2	杨礼庆	中国医科大学附属盛京医院骨科	47	337	10.0	16.0
3	许晓军	中国医科大学附属盛京医院骨科	34	177	8.0	11.0
4	巴根	中国医科大学附属盛京医院骨科	20	78	5.0	8.0